激光共聚焦显微镜是一种高分辨率的显微成像技术。普通的荧光光学显微镜在对较厚的标本(例如细胞)进行观察时，来自观察点邻近区域的荧光会对结构的分辨率形成较大的干扰。共聚焦显微技术的关键点在于，每次只对空间上的一个点(焦点)进行成像，再通过计算机控制的一点一点的扫描形成标本的二维或者三维图象。在此过程中，来自焦点以外的光信号不会对图像形成干扰，从而大大提高了显微图象的清晰度和细节分辨能力。
 

　　样品制备是检测前的关键步骤，样品需要用荧光探针(单，双和三)标记。标本可以是固定的或活组织，或固定或活的贴壁培养。细胞应在共聚焦特殊培养皿或盖玻片，悬浮细胞，萼片或滴剂和盖玻片上培养，覆盖。样品厚度约1~2mm，盖玻片厚度应小于0.17mm，滑块厚度应在0.8~1.2mm之间，表面光滑，厚度均匀，并且没有明显的干扰荧光。固定样品通常用密封片密封，通常使用通过使用pH 8.5-9的PBS制备的甘油密封。
 

　　根据实验要求制备样品完毕后。即可进行观察，基本步骤如下：
 

　　(1)开启仪器电源及光源：一般先开启激光共聚焦显微镜和激光器，再启动计算机，然后启动操作软件，设置荧光样品的激发光波长，选择相应的滤光镜组块。以便光电倍增管检测器能得到足够的信号结果。
 

　　(2)设置相应的扫描方式：在目视模式下.调整所用物镜放大倍数，在显微镜下找到需要检测的细胞。切换到扫描模式，调整双孔针和激光强度参数，即可得到清晰的共聚焦图像。
 

　　(3)获取图像：选择合适的图像分辨率，将样品完整扫描后，保存图像结果即可。
 

　　(4)关闭仪器：仪器测定样品结束后，先关闭激光器部分，计算机仍可继续进行图像和数据处理。若要退出整个激光扫描共聚焦显微镜系统，则应该在激光器关闭后，待其冷却至少10分钟后再关闭计算机及总开关。